Obtención de un soporte de afinidad para la purificación de fosfolipasas A2

Resumo

El objetivo de la presente invención es la síntesis de un soporte de afinidad con un fosfolípido inmovilizado (fofatidilcolina de yema de huevo inmovilizada a un gel amino) como ligando para la purificación de fosfolipasas A2. La Sepharose CL-4B fue activada, oxidada y aminada. La fosfatidilcolina fue inmovilizada covalentemente controlándose mediante la determinación de fosfatos en los materiales de partida y los lavados. La validez de los soportes cromatográficos obtenidos se verificó mediante la purificación de fracciones con actividad fosfolipásica provenientes de las anémonas marinas Condylactis gigantea y Stichodactyla helianthus, así como del veneno de la serpiente Crotalus durisus terrificus. Se obtuvieron perfiles de elución con un máximo típico para este procedimiento y tipo de enzima. La actividad fosfolipásica A2 se verificó cualitativamente a través de una TLC luego de la incubación de los picos obtenidos frente a la fosfatidilcolina purificada y a un sustrato fluorescente: 1-palmitoil–2-NBD-C12-PC.

Palabras claves: cromatografía de afinidad, fosfolipasa A2, inmovilización de fosfatidilcolina de yema de huevo inmovilizada, anémona de mar, gel amino.